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微量凱氏定氮法的測定調(diào)整分析

更新時(shí)間:2013-03-30      點(diǎn)擊次數(shù):2715

凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量具有一定的準(zhǔn)確度,在物質(zhì)蛋白含量的測定中運(yùn)用比較廣泛。但凱氏定氮法也存在著一些不足之處,如消化時(shí)間長、環(huán)境污染大、滴定終點(diǎn)不易控制等。鑒于此,在傳統(tǒng)凱氏定氮法的基礎(chǔ)上,對(duì)試驗(yàn)裝置如凱氏定氮儀和操作方法進(jìn)行一些改進(jìn),可以大大提高測定蛋白質(zhì)的效率,并且降低了測定過程中對(duì)空氣的污染。

凱氏定氮法的原理如下:總共包括四個(gè)步驟消化、蒸餾、吸收和滴定。首先消化過程為將含氮化合物和濃硫酸共熱,將有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮硫酸銨,具體方程式為2NH2+H2S04+2H=(NH4)2S04(其中CuSO4做催化劑)。之后就是蒸餾和吸收,將消化完的樣品轉(zhuǎn)移到定氮儀蒸餾裝置,加入過量的濃氫氧化鈉,將NH4+轉(zhuǎn)變成NH3,通過蒸餾把NH3驅(qū)入過量的硼酸溶液接受瓶內(nèi),硼酸接受氨后,形成四硼酸銨。此過程用公式表示為(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4   2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O。 zui后一步驟為滴定,用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定,直到硼酸溶液恢復(fù)原來的氫離子濃度。此時(shí)反應(yīng)式為(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3。這樣,整個(gè)凱氏定氮法的過程,就通過這幾個(gè)方程式,全部體現(xiàn)出來了。

而對(duì)于凱氏定氮法的改進(jìn),主要體現(xiàn)在:1.消化裝置的組裝:將原微量凱氏定氮法需要固定的凱氏燒瓶換成不需要固定的250mL的錐形瓶,同時(shí)在瓶口倒置一漏斗,漏斗頸頂部用玻璃彎管連接,彎管再用導(dǎo)管與內(nèi)盛稀堿溶液的大燒杯相連。2.消化過程:將樣品放入錐形瓶中,然后加入濃硫酸,當(dāng)裝置安裝完畢后,放在通風(fēng)櫥中,打開電爐,對(duì)燒瓶直接加熱,進(jìn)行消化。起初用小火并隨時(shí)調(diào)節(jié)火的大小,使產(chǎn)生的煙氣被堿液*吸收;待內(nèi)容物全部炭化,泡沫*停止后加強(qiáng)火力,隨時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)燒瓶,使瓶壁上的內(nèi)容物全部回流入消化液中,燒至溶液透明,沉淀灰白,取下待冷。3.測定過程:在100mL錐形瓶內(nèi)加入15mL體積分?jǐn)?shù)為1%硼酸吸收液,置于冷凝器下,并使管口浸入硼酸內(nèi),夾緊放氣口,取10mL樣品稀釋液或空白液由進(jìn)樣口注入反應(yīng)室。以5mL蒸餾水沖洗樣口,用量筒量取5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)25%NaOH,迅速倒入進(jìn)樣口,并立即塞好,加水于進(jìn)樣口,以防氨逸出,從第1滴溜液滴下開始計(jì)時(shí),蒸餾3min,移動(dòng)吸收瓶,使硼酸液面離開冷凝管口,再蒸餾1min,然后用少量蒸餾水沖洗冷凝管下端,從而保證了游離氨被*蒸餾接收。此時(shí)我們要確定氨氣*被吸收記錄下消耗的酸的體積。此時(shí)繼續(xù)夾緊排氣口,提起進(jìn)口塞,使蒸餾水流入反應(yīng)室,捏緊進(jìn)氣橡皮管,以斷絕蒸汽源。這時(shí)反應(yīng)室中的廢液被自動(dòng)吸出,如此反復(fù)沖洗干凈反應(yīng)室,將排氣閥打開,使反應(yīng)室外層中的廢液排出。

對(duì)于凱氏定氮法進(jìn)行改進(jìn)后,能提高定氮的效率,同時(shí)減少污染,而且操作更加簡單。另外,其測定結(jié)果跟用全自動(dòng)定氮儀測出來的結(jié)果幾乎沒有差別。因此,我們在測定蛋白質(zhì)含量或者氮元素含量的時(shí)候,需要慎重選擇測定方法,以提高其測定結(jié)果度以及測定效率。

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